聚乙二醇200 基硝苯柳胺与钥孔戚血蓝蛋白的相互作用
2013-10-17 14:48:07 点击：
聚乙二醇200 基硝苯柳胺与钥孔戚血蓝蛋白的相互作用
吴勇权, 郭 维, 许丽荣, 唐彪生, 赵娇娇, 郑绿茵, 范小林3
(赣南师范学院,江西省有机药物化学重点实验室,江西赣州341000)
摘 要:采用荧光光谱、紫外吸收光谱和圆二色谱(CD) 研究了聚乙二醇200 基硝苯柳胺与钥孔戚血蓝蛋白( KL H) 的相互作用。结果表明,聚乙二醇200 基硝苯柳胺对KL H 的荧光猝灭机制属于静态猝灭;由Lineweaver2Burk 方程计算出不同温度下结合常数K ,由Van’t Hoff 方程计算出△H 和△S 平均值,结合力主要为静电作用力;根据FÊrster非辐射能量转移机制求得给体与受体间的结合距离r = 5. 76 nm ;同步荧光光谱表明,聚乙二醇200 基硝苯柳胺能够被KL H 存储和转运,但结合时对蛋白的构象有一定的影响;圆二色光谱的数据表明相互作用后KL H 的二级结构发生了改变: KL H的α2螺旋的含量从43. 1 %下降到37. 8 %。
关键词:硝苯柳胺;钥孔戚血蓝蛋白;荧光光谱;紫外吸收光谱;圆二色谱
中图分类号:O657. 3 文献标识码:A 文章编号:100626144 (2010) 0120011204
硝苯柳胺是一种重要的杀蚴剂,对尾蚴也有一定的杀灭作用,在预防日本血吸虫病中有重要作用[122 ] 。由于硝苯柳胺难溶于水,难以直接作为杀蚴剂使用。为增强其水溶性,在硝苯柳胺分子的羟基上连接聚乙二醇200 非离子型表面活性基团,发现改性后的聚乙二醇200 基硝苯柳胺具有良好的杀蚴作用。血蓝蛋白又称血清素,在生物体内的生理功能相当于血红蛋白,是一种重要的氧载体[3 ] 。钉螺是软体动物门腹足纲中重要的螺类动物,钉螺的血液中含有的呼吸色素主要是血蓝蛋白。采用荧光光谱法研究聚乙二醇200 基硝苯柳胺与钥孔戚血蓝蛋白( KL H) 的相互作用目前尚未见相关报道。
本文研究了聚乙二醇200 基硝苯柳胺与KL H 作用的荧光猝灭机理,通过热力学参数讨论了作用力类型,用同步荧光光谱考察了聚乙二醇200 基硝苯柳胺对KL H 构象的影响,采用圆二色谱(CD) 证实其构象发生变化。该研究为进一步了解聚乙二醇200 基硝苯柳胺灭钉螺机理提供一定帮助。
1 实验部分
1. 1 仪器和试剂
LS255 型荧光光谱仪(美国, Perkin2Elmer 公司) ;Cintra 10 型紫外可见分光光度计(澳大利亚, GBC公司) ;J2810 型圆二色分光光度计(日本,J asco公司) ;Millipore 超纯水系统。聚乙二醇200 基硝苯柳胺按照文献[ 4 ]方法合成,并配制成1. 0 ×10 - 3 mol/ L 的储备液备用; KL H(购于Sigma2Aldrich 公司) 配制成1. 0 ×10 - 6 mol/ L 储备溶液,并于冰箱中(温度于0～5 ℃) 保存,其余试剂均为分析纯。
1. 2 实验方法
1. 2. 1 荧光光谱与紫外吸收光谱的测定
准确移取2. 5 mL 1. 0 ×10 - 6 mol/ L 的KL H 溶液于1 cm 的石英比色皿中,置恒温水浴锅中,用微量进样器逐次加入浓度为1. 0 ×10 - 3 mol/ L 的聚乙二醇200 基硝苯柳胺甲醇溶液进行滴定,滴定时每次加入体积为5μL ,滴定剂累加体积小于90μL ,因此可忽略体积效应。每次滴定完搅拌均匀,恒温5 min (298 K,310 K,320 K) 后,以λex = 280 nm ,测定300～445 nm 的荧光发射光谱,记录KL H 的荧光光谱及药物对KL H 的荧光猝灭光谱。固定激发和发射波长间隔△λ分别为15nm 和60 nm ,记录同步荧光光谱。测定聚乙二醇200 基硝苯柳胺(1. 0 ×10 - 6 mol/ L) 的甲醇溶液在300～445 nm 处的紫外吸收光谱,以无水甲醇溶液作空白对照。
1. 2. 2 圆二色谱的测定
吴勇权, 郭 维, 许丽荣, 唐彪生, 赵娇娇, 郑绿茵, 范小林3
(赣南师范学院,江西省有机药物化学重点实验室,江西赣州341000)
摘 要:采用荧光光谱、紫外吸收光谱和圆二色谱(CD) 研究了聚乙二醇200 基硝苯柳胺与钥孔戚血蓝蛋白( KL H) 的相互作用。结果表明,聚乙二醇200 基硝苯柳胺对KL H 的荧光猝灭机制属于静态猝灭;由Lineweaver2Burk 方程计算出不同温度下结合常数K ,由Van’t Hoff 方程计算出△H 和△S 平均值,结合力主要为静电作用力;根据FÊrster非辐射能量转移机制求得给体与受体间的结合距离r = 5. 76 nm ;同步荧光光谱表明,聚乙二醇200 基硝苯柳胺能够被KL H 存储和转运,但结合时对蛋白的构象有一定的影响;圆二色光谱的数据表明相互作用后KL H 的二级结构发生了改变: KL H的α2螺旋的含量从43. 1 %下降到37. 8 %。
关键词:硝苯柳胺;钥孔戚血蓝蛋白;荧光光谱;紫外吸收光谱;圆二色谱
中图分类号:O657. 3 文献标识码:A 文章编号:100626144 (2010) 0120011204
硝苯柳胺是一种重要的杀蚴剂,对尾蚴也有一定的杀灭作用,在预防日本血吸虫病中有重要作用[122 ] 。由于硝苯柳胺难溶于水,难以直接作为杀蚴剂使用。为增强其水溶性,在硝苯柳胺分子的羟基上连接聚乙二醇200 非离子型表面活性基团,发现改性后的聚乙二醇200 基硝苯柳胺具有良好的杀蚴作用。血蓝蛋白又称血清素,在生物体内的生理功能相当于血红蛋白,是一种重要的氧载体[3 ] 。钉螺是软体动物门腹足纲中重要的螺类动物,钉螺的血液中含有的呼吸色素主要是血蓝蛋白。采用荧光光谱法研究聚乙二醇200 基硝苯柳胺与钥孔戚血蓝蛋白( KL H) 的相互作用目前尚未见相关报道。
本文研究了聚乙二醇200 基硝苯柳胺与KL H 作用的荧光猝灭机理,通过热力学参数讨论了作用力类型,用同步荧光光谱考察了聚乙二醇200 基硝苯柳胺对KL H 构象的影响,采用圆二色谱(CD) 证实其构象发生变化。该研究为进一步了解聚乙二醇200 基硝苯柳胺灭钉螺机理提供一定帮助。
1 实验部分
1. 1 仪器和试剂
LS255 型荧光光谱仪(美国, Perkin2Elmer 公司) ;Cintra 10 型紫外可见分光光度计(澳大利亚, GBC公司) ;J2810 型圆二色分光光度计(日本,J asco公司) ;Millipore 超纯水系统。聚乙二醇200 基硝苯柳胺按照文献[ 4 ]方法合成,并配制成1. 0 ×10 - 3 mol/ L 的储备液备用; KL H(购于Sigma2Aldrich 公司) 配制成1. 0 ×10 - 6 mol/ L 储备溶液,并于冰箱中(温度于0～5 ℃) 保存,其余试剂均为分析纯。
1. 2 实验方法
1. 2. 1 荧光光谱与紫外吸收光谱的测定
准确移取2. 5 mL 1. 0 ×10 - 6 mol/ L 的KL H 溶液于1 cm 的石英比色皿中,置恒温水浴锅中,用微量进样器逐次加入浓度为1. 0 ×10 - 3 mol/ L 的聚乙二醇200 基硝苯柳胺甲醇溶液进行滴定,滴定时每次加入体积为5μL ,滴定剂累加体积小于90μL ,因此可忽略体积效应。每次滴定完搅拌均匀,恒温5 min (298 K,310 K,320 K) 后,以λex = 280 nm ,测定300～445 nm 的荧光发射光谱,记录KL H 的荧光光谱及药物对KL H 的荧光猝灭光谱。固定激发和发射波长间隔△λ分别为15nm 和60 nm ,记录同步荧光光谱。测定聚乙二醇200 基硝苯柳胺(1. 0 ×10 - 6 mol/ L) 的甲醇溶液在300～445 nm 处的紫外吸收光谱,以无水甲醇溶液作空白对照。
1. 2. 2 圆二色谱的测定
实验时光源系统用氮气保护(流量为10 L/ min) ,样品池的光径为0. 2 cm。测量参数:扫描速率100 nm/ min 。分辨率0. 1 nm ,响应时间1 s ,累积次数3 次。扫描波段为200～240 nm。KL H 浓度为2. 00 ×10 - 7 mol/ L 。向上述指定浓度KL H 中加入药物,控制药物与KL H 物质的量之比,测其CD 谱,并用仪器附带的杨氏法计算出二级结构单元的相对含量。
- 上一篇：35项国家标准正式发布 2013/10/17
- 下一篇：双波长分光光度法测定乳浊液中烈香杜鹃油含量 2013/10/17